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总RNA的提取( Trizol 法提取 )

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-06-08     
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在收集到生物材料之后,最好能即刻进行 RNA 制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备 RNA 时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻 ,以避免 RNase 的作用。


1.提取组织 RNA 时,每50~100mg 组织用 1ml Trizol 试剂对组织进行裂解;提取细胞 RNA 时,先离心沉淀细胞,每 5-10 ╳106 个细胞加 1ml Trizol 后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞;


       2.将上述组织或细胞的Trizol 裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置 5 分钟 ;


3. 在上述 EP 管中,按照每 1ml TRIZOL 加 0.2ml 氯仿的量加入氯仿,盖上 EP管盖子,在手中用力震荡 15 秒,在室温下(15℃~30℃)放置 2~3 分钟后,
12000g(2℃~8℃)离心 15 分钟;


4. 取上层水相置于新 EP管中,按照每 1ml TRIZOL加 0.5ml 异丙醇的量加入异丙醇,在室温下(15℃~30℃)放置 10 分钟,12000g(2℃~8℃)离心 10 分钟 ;


5.弃上清 ,按照每 1ml TRIZOL 加 1ml 75%乙醇进 行洗涤,涡 旋混合,7500g(2℃~8℃)离心 5 分钟,弃上清;


6. 让沉淀的 RNA 在室温下自然干燥;


7.用 Rnase-free water 溶解 RNA 沉淀。



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